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人白細(xì)胞介素22(IL-22)ELISA檢測試劑盒技術(shù)說明書
BS-1649 人白細(xì)胞介素22(IL-22)ELISA試劑盒
一、產(chǎn)品概述
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)定量檢測人血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中白細(xì)胞介素22(IL-22)的濃度。IL-22是一種由活化的T細(xì)胞、NK細(xì)胞等分泌的細(xì)胞因子，在炎癥反應(yīng)、組織修復(fù)及免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用?。本試劑盒具有高靈敏度、高特異性和重復(fù)性好的特點(diǎn)，適用于科研實(shí)驗(yàn)和臨床檢測。
二、檢測原理
包被抗體?：抗人IL-22單克隆抗體預(yù)包被于微孔板，與樣本中IL-22結(jié)合形成固相復(fù)合物。
生物素標(biāo)記抗體?：加入生物素標(biāo)記的抗人IL-22抗體，與IL-22結(jié)合形成夾心結(jié)構(gòu)。
酶結(jié)合物?：加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的鏈霉親和素，與生物素特異性結(jié)合。
顯色反應(yīng)?：加入底物(TMB)顯色，顏色深淺與IL-22濃度成正比。
終止與測定?：加入終止液終止反應(yīng)，在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度?。
三、試劑盒組成
組分 規(guī)格 數(shù)量
預(yù)包被微孔板 96孔/板 1塊
標(biāo)準(zhǔn)品(凍干) 2ng/支 2支
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 10mL 1瓶
生物素標(biāo)記抗體 6mL 1瓶
HRP標(biāo)記鏈霉親和素 6mL 1瓶
洗滌液(20×) 50mL 1瓶
顯色液(TMB) 11mL 1瓶
終止液(2M H?SO?) 6mL 1瓶
四、樣本要求
血清/血漿?：采集后室溫靜置30分鐘，離心(2000×g，15分鐘)取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
細(xì)胞培養(yǎng)上清?：離心去除細(xì)胞碎片，立即檢測或分裝保存。
注意事項(xiàng)?：樣本中避免含疊氮鈉(NaN?)或EDTA等防腐劑，以免影響檢測結(jié)果?。
五、操作步驟
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?：用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液將凍干標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶為2ng/mL，按倍比稀釋(如2ng/mL、1ng/mL、0.5ng/mL、0.25ng/mL、0.125ng/mL、0.0625ng/mL)，0ng/mL孔為空白對照。
加樣?：每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，37℃孵育90分鐘。
洗滌?：棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液洗板3次，每次浸泡1分鐘。
加生物素標(biāo)記抗體?：每孔加入100μL，37℃孵育60分鐘。
加酶結(jié)合物?：每孔加入100μL，37℃孵育30分鐘。
顯色與終止?：每孔加入90μL TMB，避光顯色15分鐘，加入50μL終止液。
測定?：450nm波長下讀取OD值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算樣本濃度?。
六、結(jié)果計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
根據(jù)樣本OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上對應(yīng)濃度，乘以稀釋倍數(shù)(如樣本未稀釋則乘1)。
建議使用專業(yè)軟件(如ELISA Calc)進(jìn)行曲線擬合和濃度計(jì)算。
七、性能指標(biāo)
靈敏度?：檢測限為0.015ng/mL。
精密度?：批內(nèi)變異系數(shù)(CV)<10%，批間CV<15%。
線性范圍?：0.0625-2ng/mL，相關(guān)系數(shù)(R2)>0.99。
回收率?：對高、中、低濃度樣本進(jìn)行加標(biāo)回收，回收率在85%-115%之間。
特異性?：不與IL-10、IL-17、IL-23等細(xì)胞因子發(fā)生交叉反應(yīng)。
八、注意事項(xiàng)
試劑保存?：未開封試劑盒2-8℃保存，有效期12個(gè)月;開封后標(biāo)準(zhǔn)品、生物素標(biāo)記抗體、HRP標(biāo)記物需分裝凍存，避免反復(fù)凍融。
操作規(guī)范?：移液時(shí)避免產(chǎn)生氣泡，洗滌時(shí)確?？變?nèi)液體棄盡。
安全防護(hù)?：終止液含強(qiáng)酸，操作時(shí)佩戴手套和護(hù)目鏡。
質(zhì)量控制?：每批次實(shí)驗(yàn)需設(shè)置雙孔復(fù)檢，OD值異常時(shí)需重復(fù)檢測。
九、常見問題分析
問題現(xiàn)象 可能原因 解決方案
標(biāo)準(zhǔn)曲線線性差 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋錯(cuò)誤 重新配制標(biāo)準(zhǔn)品，確保倍比稀釋
樣本OD值過高 樣本濃度超出檢測范圍 稀釋樣本后重新檢測
顯色過淺或未顯色 酶結(jié)合物失活 檢查試劑有效期，更換新試劑
洗滌后孔內(nèi)有殘留液體 洗滌次數(shù)不足或力度不夠 增加洗滌次數(shù)，用力拍干孔板
注：以上僅供參考，本試劑僅供科研使用，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。
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